Optimización de PCR en tiempo real con curvas de disociación para la detección de la mutación causante de deficiencia de colesterol en bovinos Holando. [Optimization of Real-Time PCR-melting for detection of the Cholesterol-deficiency mutation in Holstein Friesian cattle].

RESUMEN: El objetivo de este estudio fue optimizar un análisis mediante PCR en tiempo real con curvas de disociación para la detección confiable y económica del inserto mutante de 7,5 Kb del elemento transponible bovino BoERVK en el exón 5 del gen de la Apolipoproteína B (APOB), determinante de la d...

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Main Author:	BRANDA-SICA, A. (author)
Other Authors:	NICOLINI, M.P. (author), ARTIGAS, R. (author), FEDERICI, M. (author), LLAMBÍ, S. (author)
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Published:	2022
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description	RESUMEN: El objetivo de este estudio fue optimizar un análisis mediante PCR en tiempo real con curvas de disociación para la detección confiable y económica del inserto mutante de 7,5 Kb del elemento transponible bovino BoERVK en el exón 5 del gen de la Apolipoproteína B (APOB), determinante de la deficiencia de colesterol - CD - (OMIA 001965-9913). Asimismo, aplicando esta técnica se realizó un cribado molecular preliminar para determinar la presencia de esta mutación en una muestra de ADN de vacas Holando (H) pertenecientes a seis tambos o fincas comerciales de diferentes regiones del Uruguay. A partir de la amplificación de los productos de PCR de 170 y 146 pb se logró distinguir claramente dos genotipos: homocigota (tipo silvestre wt/wt) y heterocigota (portador de la mutación CD: MUT/wt). El genotipo homocigota wt/wt fue detectado en la muestra representativa de 103 vacas H. Se concluye que el análisis mediante PCR en tiempo real con curvas de disociación es una técnica rápida, fácilmente interpretable, de bajo costo y altamente precisa para la detección de esta mutación, el cual puede ser implementado en programas de selección genética para evitar la propagación de la enfermedad en bovinos H. ------- ABSTRACT: The purpose of this study was to optimize a real-time PCR-melting analysis for reliable and economical detection of the 7.5 Kb mutant insert of the BoERVK bovine transposable element in exon 5 of the Apolipoprotein B (APOB) gene, which causes cholesterol deficiency - CD - (OMIA 001965-9913). This technique was also used to perform a preliminary molecular screening to detect this mutation in a DNA sample of Holstein Friesian cows (HFc) of six commercial dairy farms from different regions of Uruguay. By amplifying the 170 and 146 bp PCR products, two genotypes were clearly identified: homozygote (wild type wt/wt) and heterozygote (carrier of the CD mutation: MUT/wt). The homozygous wt/wt genotype was detected in the representative sample of 103 HFc. It is concluded that Real-Time PCR-melting analysis is a fast, easily interpretable, low cost, and highly accurate technique for detecting this mutation, which can be implemented in genetic selection programs to prevent the spread of the disease in HFc.
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