Desarrollo de nuevos agentes para imagenología molecular para diagnóstico de cáncer de mama y próstata
Se desarrollaron exitosamente dos radiotrazadores basados en un análogo del péptido LHRH (LHRH(D-Lys6)): el [99mTc]Tc-HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) /Tricina/Ácido Nicotínico (NA) y el [68Ga]Ga-DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6), ambos con una pureza radioquímica superior al 94%. Ambos demostraron alta estabilidad en co...
Wedi'i Gadw mewn:
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2024
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| description | Se desarrollaron exitosamente dos radiotrazadores basados en un análogo del péptido LHRH (LHRH(D-Lys6)): el [99mTc]Tc-HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) /Tricina/Ácido Nicotínico (NA) y el [68Ga]Ga-DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6), ambos con una pureza radioquímica superior al 94%. Ambos demostraron alta estabilidad en condiciones in vitro (PBS, suero fetal bovino-SFB-) durante al menos 2-4 h, así como resistencia a competidores del radionucleido. Presentaron marcada hidrofilicidad y baja unión a proteínas plasmáticas. La evaluación in vitro, realizada en diversas líneas de cáncer de mama y próstata, junto con controles negativos, mostró una unión significativa de ambos radiofármacos a estas líneas, demostrándose a su vez su especificidad mediante ensayos de bloqueo con el ligando frío. Los estudios in vivo revelaron baja actividad en tiroides y estómago, indicando una reoxidación insignificante, con excreción principalmente renal y baja actividad en sangre. Las biodistribuciones en ratones portadores de tumores demostraron una acumulación preferencial del trazador a nivel tumoral, con una relación Tumor/Músculo mayor a 5 para ambos compuestos. Los ensayos imagenológicos por PET/CT y SPECT/CT confirmaron la visibilidad del tumor en todos los modelos estudiados. Asimismo, se logró sintetizar un tercer radiofármaco, el [99mTc]Tc-HYNIC-Trastuzumab con una pureza radioquímica superior al 90%. Este demostró estabilidad in vitro en NaCl 0.9%, SFB y competidores hasta 24 h post-marcación. La evaluación in vivo en líneas de cáncer de próstata, mediante unión celular y citometría de flujo, mostró una sobreexpresión moderada a alta del receptor HER2 en las líneas celulares evaluadas hasta 4 h, siendo esta específica. Las biodistribuciones evidenciaron una alta captación en sangre y bazo, conforme a las características de estas moléculas de alto peso molecular. Los ensayos de imagenología SPECT/CT revelaron tumores visibles para los modelos de cáncer de próstata evaluados ( LnCap y PC3) hasta 24 h post inyección. En resumen, se han desarrollado tres innovadores radiofármacos para el diagnóstico imagenológico de cáncer de mama y próstata, siendo los resultados obtenidos altamente prometedores. No obstante, se requiere ampliar los estudios para continuar la caracterización de los complejos. |
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La evaluación in vitro, realizada en diversas líneas de cáncer de mama y próstata, junto con controles negativos, mostró una unión significativa de ambos radiofármacos a estas líneas, demostrándose a su vez su especificidad mediante ensayos de bloqueo con el ligando frío. Los estudios in vivo revelaron baja actividad en tiroides y estómago, indicando una reoxidación insignificante, con excreción principalmente renal y baja actividad en sangre. Las biodistribuciones en ratones portadores de tumores demostraron una acumulación preferencial del trazador a nivel tumoral, con una relación Tumor/Músculo mayor a 5 para ambos compuestos. Los ensayos imagenológicos por PET/CT y SPECT/CT confirmaron la visibilidad del tumor en todos los modelos estudiados. Asimismo, se logró sintetizar un tercer radiofármaco, el [99mTc]Tc-HYNIC-Trastuzumab con una pureza radioquímica superior al 90%. Este demostró estabilidad in vitro en NaCl 0.9%, SFB y competidores hasta 24 h post-marcación. La evaluación in vivo en líneas de cáncer de próstata, mediante unión celular y citometría de flujo, mostró una sobreexpresión moderada a alta del receptor HER2 en las líneas celulares evaluadas hasta 4 h, siendo esta específica. Las biodistribuciones evidenciaron una alta captación en sangre y bazo, conforme a las características de estas moléculas de alto peso molecular. Los ensayos de imagenología SPECT/CT revelaron tumores visibles para los modelos de cáncer de próstata evaluados ( LnCap y PC3) hasta 24 h post inyección. En resumen, se han desarrollado tres innovadores radiofármacos para el diagnóstico imagenológico de cáncer de mama y próstata, siendo los resultados obtenidos altamente prometedores. No obstante, se requiere ampliar los estudios para continuar la caracterización de los complejos.Abreviaturas – 1-Introducción – 1 - Cáncer -- 1.1 Cáncer de mama -- 1.1.1 Epidemiologia -- 1.1.2 Clasificación -- 1.1.3 Fisiopatología y Mecanismos moleculares -- 1.1.4 Diagnóstico -- 1.1.5 Tratamiento -- 1.1.6 Rol de la Medicina Nuclear en diagnóstico -- 1.2 Cáncer de Próstata -- 1.2.1 Epidemiologia -- 1.2.2 Clasificación -- 1.2.3 Fisiopatología y mecanismos moleculares -- 1.2.4 Diagnóstico -- 1.2.5 Tratamiento -- 1.2.6 Rol de la Medicina Nuclear en CaP – 2-LHRH -- 2.1: Funciones endógenas del decapéptido LHRH -- 2.2 LHRH en cáncer -- 2.3 Estrategias terapéuticas basadas en el LHRH -- 2.4 LHRH Como agente de imagenología -- 3. EGFRs -- 3.1 Ligandos de la familia -- 3.2 Rol de los EGFRs en el Cáncer -- 3.3 Trastuzumab como ligando de HER2 -- 3.4: Trastuzumab en CaP -- 4-Imagenología Molecular -- 4.1 Principios básicos de SPECT -- 4.2 Principios básicos de PET -- 4.3 Agentes de imagenología molecular -- 4.3.1 Anticuerpos monoclonales como agentes de imagen -- 4.3.2 Péptidos como agentes de imagen -- 5-Radiofármacos -- 5.1 Radiofármacos de diagnóstico -- 5.1.1 Tecnecio-99m -- 5.1.2 Radiofármacos de 99mTc -- 5.1.3 Estrategias de marcación con 99mTc -- 5.1.4 HYNIC como agente quelante bifuncional -- 5.2 Galio 68 -- 5.2.1 Marcación con 68Ga -- 5.2.3 Radiofármacos de 68Ga -- 5.2.4 DOTA como agente quelante Bifuncional – 2-Objetivos -- 2.1: Objetivo general -- 2.2: Objetivos específicos -- 3-Generación Radiofármaco de 99mTc basado en el péptido HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) -- 3.1 Materiales y Métodos -- 3.1.1 Síntesis de péptido HYNIC-LHRH(D-Lys6)-GSG -- 3.1 2. Marcación del péptido con [ 99mTc]TcO4- -- 3.1.3 Purificación de los complejos [99mTc]Tc--HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) /Coligando -- 3.1.4 Coeficiente de reparto o Log P -- 3.1.5 Estabilidad in vitro -- 3.1.6 Modelos celulares -- 3.1.7 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 3.1.8 Modelos in vivo -- 3.1.9 Imágenes SPECT/CT -- 3.2 Resultados y Discusión -- 3.2.1 Síntesis de HYNIC-GSG-LHRH -- 3.2.2 Marcación con 99mTc de HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) -- 3.2.3 Coeficiente de Reparto o log P -- 3.2.4 Estabilidad in vitro -- 3.2.5-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de mama -- 3.2.6-Estudios biodistribución en ratones hembra normales y xenográficos (4T1) -- 3.2.7-Estudios SPECT/CT en ratones hembra xenográficos (4T1, BT-474, MCF-7) -- 3.2.8-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de próstata -- 3.2.9-Estudios biodistribución en ratones macho normales y xenográficos (LnCap, PC3) -- 3.2.10-Estudios imagenológicos SPECT/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) -- 3.3 Conclusiones -- 4-Generación Radiofármaco de 68Ga basado en el péptido Ahx-DOTA-LHRH(D-Lys6) -- 4.1 Materiales y Métodos -- 4.1.1 Síntesis del péptido DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) -- 4.1 2. Marcación del péptido con [ 68Ga]GaCl3 -- 4.1.3 Purificación del radiofármaco [68Ga]Ga-DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) -- 4.1.4 Coeficiente de reparto o Log P -- 4.1.5 Estabilidad in vitro -- 4.1.6 Modelos celulares -- 4.1.7 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 4.1.8 Modelos in vivo -- 4.1.9 Imágenes PET/CT -- 4.2 Resultados y Discusión -- 4.2.1 Síntesis del precursor -- 4.2.2 Marcación del DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) con [ 68Ga]GaCl3 -- 4.2.3 Coeficiente de Reparto o log P -- 4.2.4 Estabilidad in vitro -- 4.2.5-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de mama -- 4.2.6-Estudios biodistribución en ratones hembra normales y xenográficos (4T1) -- 4.2.7-Estudios PET/CT en ratones hembra xenográficos (4T1) -- 4.2.8-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de próstata -- 4.2.9-Estudios biodistribución en ratones macho normales y xenográficos (LnCap, PC3) -- 4.2.10-Estudios PET/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) -- 4.3 Conclusiones -- 5-Generación Radiofármaco de 99mTc basado en el anticuerpo Trastuzumab (Herceptin) -- 5.1 Materiales y Métodos -- 5.1.1 Conjugación HYNIC-Trastuzumab -- 5.1.2 Marcación con 99mTc de Tfa-HYNIC-Trastuzumab y controles de calidad -- 5.1.3. Estabilidad de estabilidad in vitro del complejo [99mTc]Tc-HYNIC-Trastuzumab -- 5.2.4 Conjugación de Trastuzumab con isotiocianato de fluoresceína (FITC) -- 5.2.5 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 5.2.6 Análisis por citometría de flujo -- 5.2.7 Modelos in vivo -- 5.2.8 Imágenes de modelos SPECT/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) y ratones Nude hembras portadores de tumores (MCF-7, BT-474) -- 5.2 Resultados y Discusión -- 5.1.1 Conjugación HYNIC-Trastuzumab -- 5.2.2 Marcación con [99mTc]TcO4- de Tfa-HYNIC-Trastuzumab y controles de calidad -- 5.2.3. Estabilidad de estabilidad in vitro del complejo [99mTc]Tc—HYNIC-Trastuzumab -- 5.3.4 Conjugación de Trastuzumab con isotiocianato de fluoresceína (FITC) -- 5.3.5 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 5.3.6 Análisis por citometría de flujo -- 5.3.7 Modelos in vivo -- 5.3.8 Imágenes SPECT/CT -- 5.3 Conclusiones -- 6-Conclusiones finales -- 7-Perspectivas a futuro -- 8-Producción bibliográfica durante el período del Doctorado -- Anexos -- BibliografíaUdelar. FQ : PEDECIBAAlfaya Bianchi Lucía, Universidad de la República (Uruguay). Facultad de Química2024-11-15T17:29:23Z2024-11-15T17:29:23Z2024Tesis de doctoradoinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersion247 p.application/pdfAlfaya Bianchi, L. Desarrollo de nuevos agentes para imagenología molecular para diagnóstico de cáncer de mama y próstata [en línea] Tesis de doctorado. Montevideo : Udelar. FQ : PEDECIBA, 2024https://hdl.handle.net/20.500.12008/47098reponame:COLIBRIinstname:Universidad de la Repúblicainstacron:Universidad de la RepúblicaesspaLas obras depositadas en el Repositorio se rigen por la Ordenanza de los Derechos de la Propiedad Intelectual de la Universidad de la República.(Res. Nº 91 de C.D.C. de 8/III/1994 – D.O. 7/IV/1994) y por la Ordenanza del Repositorio Abierto de la Universidad de la República (Res. Nº 16 de C.D.C. de 07/10/2014)info:eu-repo/semantics/openAccessAn error occurred getting the license - uri.Licencia Creative Commons Atribución - No Comercial - Sin Derivadas (CC - By-NC-ND 4.0)oai:colibri.udelar.edu.uy:20.500.12008/470982026-04-14T10:16:58Z |
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